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    金擔子素A(AbA) A6870
    物品單位 價格 品牌
    瓶(1mg) 1790 solarbio
    • 產地:北京
    • 貨號:A6870
    • 發布日期: 2019-10-11
    • 更新日期: 2019-10-11
    產品詳細說明
    產地 北京
    品牌 solarbio
    貨號 A6870
    用途范圍 金擔子素A(Aureobasidin A,AbA)是從絲狀真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分離出來的環酯肽類抗生素,具有很強的抗真菌能力。
    英文名稱 Aureobasidin A(AbA)
    純度 ≥95%%
    CAS編號
    規格 1mg
    保質期 2年
    是否進口

     

    金擔子素A(Aureobasidin A,AbA)是從絲狀真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分離出來的環酯肽類抗生素,具有很強的抗真菌能力。在較低的濃度下(0.1-0.5 μg/ml)即可對酵母產生毒性。對其敏感的真菌種類包括:出牙酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、構巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(A. niger.)。作用機制在于AbA抑制了真菌生長所依賴的肌醇磷酰胺(inositol phosphorylceramide,IPC)合成酶的活性,干擾鞘脂合成,從而進一步殺死菌株。編碼IPC合成酶的基因研究較多的有來自釀酒酵母菌的AUR1 基因,以及構巢曲霉的AURA基因,兩者具有同源性。通過對這些編碼基因進行突變即可使得菌株對AbA產生抗性,如AUR1-C基因。

    AbA非常適合用作陽性*子篩選用的藥物選擇性標記。AbA抗性也是酵母單/雙雜交研究中理想的報告子。本品為溶于甲醇的AbA溶液,濃度為1 mg/ml。具體的工作濃度取決于宿主細胞的敏感度(見表1. AbA對各種酵母菌的低抑菌濃度(MIC))。

    操作步驟(抗AbA的酵母轉化系統)

    1)加入0.5 ml過夜培養的酵母到50 ml YPD培養基中(配方:1L液體培養基含有10g yeast extract,20g polypeptone, 20g D-glucose;固體培養基另外加入2%瓊脂;)。

    2)30℃培養約6小時,測定OD660為1~2。使用二倍體時,測定OD660為2~4。

    3)1,000×g離心5分鐘。

    4)用10 ml Solution A(配方:100 mM Lithium acetate,10 mM Tris-HCl pH 7.5,1 mM EDTA)懸浮沉淀,1,000×g離心5分鐘。

    5)用Solution A重懸沉淀,直到OD660為150。

    6)在管內分取100 μl細胞懸浮液,30℃培養1小時。

    7)加入5 μg載體(環狀或線性DNA)和150 μg Carrier DNA(已經過100℃加熱10分鐘,并迅速冷卻)。

    【注】:pAUR101需使用線性DNA進行轉化。使用環狀DNA會降低轉化效率甚至轉化不成功。pAUR112和pAUR123需使用完整的質粒DNA進行轉化。
    8)加入850 μl Solution B(配方:取40 g Polyethylene Glycol 4000溶于100 ml Solution A充分溶解,需要現用現配),輕輕混勻。

    9)30℃培養30分鐘后,42℃培養15分鐘。

    10)室溫放置10分鐘。

    11)5,000 rpm離心1分鐘,用5 ml YPD培養基懸浮沉淀。

    12)30℃培養6小時~過夜。

    13)5,000~10,000 rpm離心,用1-10 ml 0.9% NaCl懸浮沉淀。

    14)在YPD選擇培養基平板(含有一定濃度的AbA,依菌株類型而定)上接種100 μl細胞懸液。30℃培養3-4天后轉化完成。

    15)挑取陽性轉化子,和/或測定轉化效率(以每微克質粒DNA轉化的菌落數來表示)。


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